叶绿素a和叶绿素b是植物吸收光能的主要色素，准确测定两者镁同位素组成对研究叶绿素形成过程中镁的生物合成路径等问题具重要意义，而将两者分离并收集是使用多接收电感耦合等离子体质谱仪（MC-ICP-MS）测定其镁同位素值的关键。高效液相色谱（HPLC）是分离叶绿素的常用仪器，但目前分离叶绿素的HPLC方法主要用于细菌和藻类叶绿素分离。因此需建立一套能将植物叶绿素a和叶绿素b分离的方法，且该方法分离样品适用于MC-ICP-MS镁同位素测定。本文基于665nm检测波长和C18色谱柱（7.6mm×250mm，5μm），以三因素三水平正交设计优化HPLC条件，优化后柱温为25℃，流速为1mL/min，流动相为甲醇-丙酮=80:20（V:V）。结果表明，以外标法定量分析叶绿素a和叶绿素b，其标准曲线在1~50mg/L浓度范围内相关系数均大于0.999，检出限为0.174~0.385mg/L，精密度相对标准偏差小于3.558%，样品加标回收率介于91.793~110.740%。使用该方法所分离样品的镁同位素测定结果表明该方法为植物叶绿素a和叶绿素b的分离提供了技术支撑，且分离样品可用于镁同位素测定。

镁同位素；高效液相色谱；叶绿素